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抗原修復(fù)液胰酶法

更新時(shí)間:2024-09-26

簡(jiǎn)要描述:

抗原修復(fù)液胰酶法
組織在制作過程中,由于化學(xué)試劑的作用封閉了抗原,又由于熱的作用致使部分抗原的肽鏈發(fā)生扭曲,致使在免疫組化的染色過程中不能將其顯示出來,為了解決上述的問題,利用化學(xué)試劑和熱的作用將這些抗原重新暴露出來或修正過來的過程稱為抗原修復(fù)。

抗原修復(fù)液胰酶法

在免疫組化染色后的鏡下觀察中,有發(fā)現(xiàn)這樣的結(jié)果,陽(yáng)性物反應(yīng)不強(qiáng),時(shí)隱時(shí)現(xiàn),表達(dá)不均勻,有時(shí)可出現(xiàn)假陰性,這是因?yàn)椋?br/>1.組織在用甲醛固定的過程中所形成的醛鍵可封閉抗原的決定簇。甲醛與組織蛋白質(zhì)類的反應(yīng)是多樣而復(fù)雜的,因?yàn)樗芎投喾N不同的功能基團(tuán)結(jié)合,在多數(shù)情況下在其間形成橋鍵8。這也是甲醛的一個(gè)作用,因?yàn)樗且环N聚合固定劑,因而能在相鄰的蛋白質(zhì)鍵間形成橋鍵的作用。
2. 甲醛在保存進(jìn)程中會(huì)形成羥甲基,也可封閉抗原決定簇。據(jù)French和Edsall的研究認(rèn)為,遇到的甲醇反應(yīng),就是加到一個(gè)含反應(yīng)性氫原子的化合物中,形成一個(gè)羥甲基化合物。
3.在組織固定過程中,甲醛與蛋白質(zhì)發(fā)生交聯(lián),形成醛交聯(lián)蛋白,這種化合物封閉了抗原,使之無法表達(dá)出來。
為了解決上述存在的問題,更好地暴露出抗原,將其很好地顯示出來,*的方法就是必須進(jìn)行抗原修復(fù)。
至今為止,抗原修復(fù)有許多種方法,在這些方法中,有的是根據(jù)抗體的要求來進(jìn)行,有的是根據(jù)抗原的表達(dá)程度來進(jìn)行,我們則對(duì)每種病例每項(xiàng)檢測(cè),都要求必須進(jìn)行抗原修復(fù),以達(dá)到抗原全面表達(dá)的狀態(tài)。

抗原修復(fù)液胰酶法使用方:

切片脫蠟水化,將100-200μl抗原修復(fù)液加至玻片上覆蓋組織,37℃ 10-15分鐘后(室溫條件下時(shí)間適當(dāng)延長(zhǎng)),PBS洗3次,隨后按選好的免疫組織化學(xué)染色方法進(jìn)行染色。隨后即可進(jìn)行封閉等后續(xù)的免疫染色步驟。


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